色谱法的分离原理是:溶于流动相 (mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary phase) 发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 色谱法很早是由植物学家茨维特(tswett)在1906年研究用碳酸钙分离植---素时发现的,tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描述他的实验,色谱法(chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为---液相色谱法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。
(1)液相色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝(封头)与柱填料等组成。
柱管:多用不锈钢制成,若果使用时柱压不高于70kg/cm2时,也可采用厚壁玻璃或石英管,管内壁要求有---的光洁度。用于柱填料的装填。空柱各组件均为不锈钢材质,---受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。压帽:即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽,中部有小孔,多为聚四氟乙烯制成,---液相色谱效果好,用于固定筛板。
密封环:位于接头螺旋环内壁的弹性环,多为聚四氟乙烯制成,用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。
(2)柱填料:
液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的,柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱:
多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种,其颗粒直径在3-10 μm的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合-cn,-nh2等---团即所谓的键合相硅胶。
反相柱:
主要是以硅胶为基质,在其表面键合十八烷基---团(ods)的非极性填料。也有无定型和球型之分。
常用的其他的反相填料还有键合c8、c4、c2、---等,其颗粒粒径在3-10μm之间。
筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,---液相色谱,替换筛板或更换柱子。
存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子
可能柱超载,减少进样量。
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