如何用制备色谱柱制备低含量的杂质？

制备色谱柱为zorbaxsb-c18 9.4*250mm及gilson馏分收集器，色谱仪为agilent1100或lc-6a。想用其制备面积归一化法含量为0.05%左右的杂质，初步提纯后用高分辨的lc-ms进行定性分析。如何设定色谱条件，如，流量、进样量、样品的浓度、切割点的设置、是否要浓缩，要求将95%以上的主峰切除。

（主峰后有二个杂质靠得很近。）

答：

1.制备用的流动相尽量等级高一点，否则流动相中的杂质会影响lc-ms分析。

2.使用馏分收集器时，---体积一定要计算准确，检测器的响应时间设到很小，否则都会影响收集的纯度和回收率。制备柱的流速一般与直径的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速为1ml/min，9.4mm制备柱用1*（9.4/4.6）2,大约为4ml/min。进样量设到几个mg应该基本没有过载。进样样品浓度越高越好。假如进样10mg，理论计算0.05%的杂质大约只有5μg，显然浓度太低，尽量是多做几次，合并馏分然后浓缩后做lc-ms分析。

工业制备色谱

蛋白质是具有一定构象(空间结构)的生物大分子:其一级结构是形成肽链的---酸序列(数目、种类、顺序)，是蛋白质结构的基础;在一级结构水平上，部分肽链发生卷曲和折叠，形成其二级结构，这种卷曲和折叠是靠肽链中的---与---之间的氢键维持的:在二级结构的基础上，多肽链再盘绕和折叠，形成三维空间形态，即为蛋白质的三级结构:而蛋白质的四级结构是指同一蛋白质中各条肽链之间的相互关系。

离子交换色谱

离子交换色谱，用离子交换树脂作为固定相，主要用来分离带电离子的混合物。流动相中的组分离子与离子交换树脂（固定相）上的离子基团进行可逆交换，这种可交换的离子是阴离子或阳离子。

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如何制备色谱用氧化铝

通常的做法是利用水合氧化铝的再沉淀工艺，可制备具有不同化学组分和相组分的氧化铝，步骤如下：首先将水合氧化铝溶于酸；再以碱中和，使氢氧化铝沉淀出来并除去部分杂质；经过不同煅烧工艺，得到具有不同水含量、不同相、不同孔结构的氧化铝。

用作吸附材料和色谱填料基质的氧化铝主要是γ-氧化铝，通常呈碱性，将其溶于水ph值可达9，故常被称为碱性氧化铝，利用酸中和可得到中性甚至是酸性氧化铝。